實(shí)驗(yàn)室色譜檢測(cè)常用方法
更新時(shí)間：2022-10-25 瀏覽次數(shù)：1152
一、柱子可以分為：加壓，常壓，減壓
壓力可以增加淋洗劑的流動(dòng)速度，減少產(chǎn)品收集的時(shí)間，但是會(huì)減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時(shí)候，常壓柱是效/率最高的，但是時(shí)間也最長(zhǎng)，比如，天然化合物的分離，一個(gè)柱子幾個(gè)月也是有的。
減壓柱能夠減少硅膠的使用量，感覺能夠節(jié)省一半甚至更多，但是，由于大量的空氣通過硅膠會(huì)使溶劑揮發(fā)（有時(shí)在柱子外面有水汽凝結(jié)），以及有些比較易分解的東西可能得不到，而且還必須同時(shí)使用水泵抽氣（很大的噪音，而且時(shí)間長(zhǎng)）。以前曾經(jīng)大量的過減壓柱，對(duì)它有比較深厚的感情，但是自從嘗試了加壓后，就幾乎再也沒動(dòng)過減壓的念頭了。
加壓柱是一種比較好的方法，與常壓柱類似，只不過外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚缸供氣的就行）。特別是在容易分解的樣品的分離中適用。壓力不可過大，不然溶劑走的太快就會(huì)減低分離效果。個(gè)人覺得加壓柱在普通的有機(jī)化合物的分離中是比較適用的。
二、關(guān)于柱子的尺寸，應(yīng)該是又粗又長(zhǎng)的最好
柱子長(zhǎng)了，相應(yīng)塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣后樣品原點(diǎn)就小（反映在柱子上就是樣品層比較?。?，這樣相對(duì)減小了分離難度。試想如果柱子10 cm，而樣品層只有2 cm，那么分離難度可想而知，恐怕要用很低極性溶劑慢慢沖了。如果樣品層有0.5 cm，那么各組分就比較容易得到分離了。當(dāng)然采用粗大的柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了，不過這些成本相對(duì)于產(chǎn)品來說也許就不算什么了（溶劑回收重蒸后也可減小了部分浪費(fèi)）。
現(xiàn)在常見的柱子徑高比一般為1：5~10，硅膠量是樣品量的30～40倍，選擇時(shí)要具體分析。如果所需組分和雜質(zhì)比較容易分開（是指所需組分Rf在0.2～0.4，雜質(zhì)相差0.1以上），就可以少用硅膠，用小柱子（例如200 mg樣品，用50px×500px柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，可以增加柱子直徑，比如用75px的，也可以減小淋洗劑極性等。關(guān)于無水無氧柱，適用于對(duì)氧，水敏感，易分解的產(chǎn)品。
可以濕柱，也可以干柱。不過在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次，因?yàn)?，溶劑和硅膠飽和時(shí)放出的熱量有可能使產(chǎn)品分解，畢竟要分離的是敏感的東東，小心不為過。因?yàn)榉蛛x的東西比較敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。
三、關(guān)于濕法、干法上樣
濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等。但溶劑越少越好，不然溶劑就成了淋洗劑了。很多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒關(guān)系?？墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會(huì)析出，一般都是比較大量的樣品才會(huì)出現(xiàn)，是因?yàn)楣枘z對(duì)樣品的吸附飽和，而樣品本身又是比較好的固體才會(huì)發(fā)生，應(yīng)該先重結(jié)晶，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分，如果不能重結(jié)晶那就不管它了，直接過就是了，樣品隨著淋洗劑流動(dòng)會(huì)溶解的。
有些樣品溶解性差，能溶解的溶劑又不能上柱（比如DMF，DMSO等，會(huì)隨著溶劑一起走，顯色是一個(gè)很長(zhǎng)的脫尾），這時(shí)就必須用干法上柱了。樣品和硅膠的量有一種說法是1：1，應(yīng)該是越少越好，但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說明有的樣品沒有吸附在硅膠上）。
四、溶劑的選擇
當(dāng)然是最/便宜，最/安全，最/環(huán)保的了，所以大多選用石油醚，乙酸乙酯。文獻(xiàn)中有用正己烷的，太貴了，除非特別需要盡量不要用，不然銀子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，不過，因?yàn)闃O性很小，有時(shí)還是非它不可。乙/醚也可以用，但是，就是容易睡覺，注意保持清醒別讓溶劑流干了，那樣柱子也就不爽了。
二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅膠的吸附是一個(gè)放熱過程，所以夏天的時(shí)候經(jīng)常會(huì)在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時(shí)候會(huì)好一些。甲醇，據(jù)說能溶解部分硅膠，所以產(chǎn)品如果想過元素分析的話要留神，應(yīng)該經(jīng)過后繼處理，比如，重結(jié)晶等。其他溶劑用的相對(duì)較少，要依不同需要選擇。
由于某些原因，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛），如用10 L或25 L塑料桶裝的，要注意這些工業(yè)品的純度是較低的。經(jīng)常能夠從送來的大桶底部看見有色的雜質(zhì)，其他雜質(zhì)就可想而知了，所以在比較嚴(yán)格的柱分時(shí)就要對(duì)溶劑重蒸。當(dāng)然，過原料時(shí)就可以免去這一步了，反正下面還有提純的方法。
另外，溶劑在過柱子后最好也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費(fèi)，缺點(diǎn)是要消耗一定的人工。這里要注意的是，一般在過柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會(huì)導(dǎo)致/極性的變化，一般會(huì)使得極性變大，在梯度淋洗時(shí)比較合適，正好極性越來越大了。在過完柱子后，溶劑最后回收要采用常壓，因?yàn)樵跍p壓旋蒸時(shí)會(huì)有部分低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一起出來，常壓時(shí)就會(huì)減少這種現(xiàn)象，如果雜質(zhì)和你下面要過的樣品有反應(yīng)那就慘了。
五、關(guān)于操作問題
1.裝柱
柱子下面的活塞一定不要涂潤(rùn)滑劑，會(huì)被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的，可以采用四氟節(jié)門的。干法和濕法裝柱沒什么區(qū)別，只要能把柱子裝實(shí)就行。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品就會(huì)從一側(cè)斜著下來）。書中寫的都是不能見到氣泡，其實(shí)在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒太大的影響，一加壓氣泡就全下來了。當(dāng)然如果你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習(xí)了。但是柱子更忌諱的是開裂，甭管豎的還是橫的，都會(huì)影響分離效果，甚至作廢！
2.加樣
用少量溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開，待溶劑層下降至石英砂面時(shí)，再加少量低極性溶劑，然后再打開活塞，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗劑，一開始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～100px就夠了），再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。
3.淋洗劑的選擇
感覺上要使所需點(diǎn)在Rf0.2~0.3左右的比較好。不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開，過柱子就用那種極性，如果Rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分開，因?yàn)橹邮且粋€(gè)多次爬板的狀態(tài)。
可以通過公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。
4.樣品的收集
用硅膠作固定相過柱子的原理是一個(gè)吸附與解吸的平衡，所以，如果樣品與硅膠的吸附比較強(qiáng)的話，就不容易流出。這樣就會(huì)發(fā)生，后面的點(diǎn)先出，而前面的點(diǎn)后出。這時(shí)可以采用氧化鋁作固定相。
另外，收集的試管大小要以樣品量而定，特別是小量樣品，如果用大試管，可能一根就收到了三個(gè)樣品。嗚嗚，如果都用小試管那工作量又太大。
5.最后的處理
柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質(zhì)也會(huì)累積到產(chǎn)品中，所以，如果想送分析，最好用少量的溶劑洗滌一下，因?yàn)?，大部分雜質(zhì)溶在溶劑里，一洗基本就沒了，必要時(shí)進(jìn)行重結(jié)晶。